Главная
»
Статьи
»
Загрязнение воды кишечной палочкой
Загрязнение воды кишечной палочкой
Большинство штаммов E.coli безвредно: многие из них обитают в пищеварительном тракте совершенно здоровых людей и животных. Однако некоторые типы способны вызывать пищевые отравления, и в этом случае опасность кишечной палочки для организма человека велика, вплоть до летального исхода.
Заболеть можно не только при употреблении зараженной питьевой воды — бактерия нередко попадает в ЖКТ при случайном заглатывании во время плавания или купания. E.coli провоцирует развитие следующих заболеваний:
- острой кишечной инфекции;
- у детей и пожилых людей — гемолитико-уремического синдрома с исходом в виде острой почечной недостаточности;
- при оседании на мочевыводящих путях — уретрита, цистита, вульвовагинита.
Как бактерия кишечной палочки попадает в воду
Заражение может происходить разными путями:
- сброс фекальных стоков из поврежденной или устаревшей канализации;
- сброс бытовых стоков, пищевых отходов в водоем, служащий местом для купания;
- использование источника воды для водопоя КРС;
- неполадки в системе водоснабжения/водоподготовки.
Быстрее всего E.coli размножается летом — высокая температура стимулирует деление микроорганизма. Весной после затяжных дождей или во время таяния снега бактерия проникает в грунтовые воды, а оттуда и в устройства водоснабжения. Из-за некачественной очистки воды на коммунальных предприятиях опасный серотип через водопровод оказывается в домах обычных людей.
Под угрозой находятся и неправильно смонтированные частные скважины и колодцы. Грунтовые воды могут пересекаться с выгребной ямой соседа — в этом случае загрязнение возможно в любой момент.
Кипячение способно уничтожить кишечную палочку, однако воду для купания и хозяйственных нужд у нас не принято кипятить. А между тем, чтобы заболеть, достаточно просто помыть загрязненной водой фрукты или искупаться в ней.
Как определить наличие E.coli
Иногда кишечную палочку в воде можно выявить даже без анализов, уж слишком характерны внешние признаки:
- специфический неприятный запах экскрементов;
- желтовато-коричневый оттенок жидкости;
- наличие фекалий на берегу водоема.
Однако это касается только поверхностных, открытых источников и высокой степени загрязнения. Обнаружить визуально бактерию при ее минимальных концентрациях в обычной питьевой воде или внешне чистом пруду невозможно.
В этой ситуации прибегают к лабораторным исследованиям. Главный параметр, исследуемый при анализе — количество бактерий в 1 миллилитре жидкости. Согласно СанПину 2.1.4.1074-01 и ГОСТу 2874-82, данная цифра должна быть равна 100 экз/мл. Превышение указанной концентрации означает загрязнение воды — в таком случае следует немедленно прекратить использование источника.
Способы очистки
Различают три основных метода очистки воды от кишечной палочки:
- химические, когда в жидкость добавляют специальные реагенты — хлорную известь, формалин, едкий натр и пр. (применимы для сточных вод) или менее токсичный гипохлорит натрия;
- электрические, подразумевающие применение электролиза;
- физические — воздействие ультразвуком, ультрафиолетом, кипячение.
Отдельно выделяют озонирование и адсорбцию бактерий на активированном угле, насыщенном серебром.
Исследования показывают, что вода из-под крана в связи с использованием мощных очистных сооружений нередко значительно безопаснее колодезной. Последняя же зачастую не соответствует принятым нормативам по микробиологическим показателям. Поэтому, если была обнаружена кишечная палочка в питьевой воде из колодца, необходимо провести шоковую дезинфекцию и установить очистительные фильтры. Если анализ показал наличие E.coli в городском водопроводе, следует оперативно сообщить о проблеме в местный водоканал и не употреблять воду без предварительного кипячения.
Защитить себя от возможного заражения можно, обратившись в «Аквабосс». Мощные системы ультрафильтрации обеспечат надежный физический барьер не только от E.coli, кишечных паразитов, но и вирусов! В наличии есть и более простые, бюджетные установки: ультрафиолетовые лампы, системы обратного осмоса.
Заявка на подбор оборудования
Краткая форма заявки
Развернутая форма заявки
29 September 2018 /
9501 просмотров
Кишечная палочка в воде – причины, что делать, как очистить воду
То, что сырая вода из-под крана или из колодца зачастую непригодна для питья, знают многие. Но в чём причина? Как правило, самый распространённый ответ на этот вопрос: там микробы. Но какие именно микроорганизмы в воде представляют реальную опасность для здоровья, как определить загрязнение воды, как очистить воду, например, от кишечной палочки и других болезнетворных бактерий? Обо всём этом читайте в нашей статье.
Кишечная палочка в питьевой воде: откуда?
Для начала разберёмся, что собой представляет кишечная палочка. Эта бактерия живёт в кишечнике человека и животных. Попадая в воду вместе с бытовыми и канализационными стоками, отходами жизнедеятельности, она приводит к её загрязнению. Как может оказаться кишечная палочка в воде? Вариантов несколько.
- попадание фекальных стоков вследствие неполадок или устаревшей канализационной системы
- использование поверхностного водоёма для водопоя крупного рогатого скота
- попадание в водоём бытовых стоков из частных хозяйств
Особенно активно размножается кишечная палочка в воде в тёплое время года, как раз в разгар пляжного сезона. А ведь воду с ней опасно не только пить, но и купаться в ней. Также весной во время таяние снега или после затяжных дождей, кишечная палочка может проникнуть в грунтовые воды, а оттуда – в систему водоснабжения.
То, что кишечная палочка, возможно, присутствует в воде, иногда можно предполагать даже без проведения анализов. Вода имеет очень неприятный запах, может присутствовать желтовато-коричневый оттенок. Но часто бывает, что вроде бы обычная на первый взгляд вода представляет серьёзную опасность для здоровья. Бывает, что кишечная палочка обнаруживается в питьевой воде из-под крана. К этому приводят неполадки в системе водоснабжения или водоподготовки.
Достоверно определить состав поможет только анализ воды в лаборатории.
Чем опасна кишечная палочка в воде?
Кишечная палочка в воде может нанести серьёзный вред здоровью: от банального расстройства желудка до тяжёлых воспалений и поражений внутренних органов. При попадании в организм кишечная палочка может провоцировать:
- кишечные инфекции (чаще всего проявляющиеся в виде диареи, тошноты, рвоты и т.п.)
- воспаления мочевыводящих путей и половых органов
- уретрит (у мужчин)
- гемолитико-уремический синдром (в группе риска, прежде всего, дети и пожилые люди), который может привести к острой почечной недостаточности
Среди множества штаммов кишечной палочки самым опасным считается E. Coli.
Согласно Государственным санитарным нормам, колиморфных бактерий (бактерий группы кишечной палочки) в питьевой воде, подающейся в водопровод, не должно быть вообще. Их наличие может спровоцировать эпидемическую ситуацию в насёлённом пункте. Для того чтобы заразиться кишечной палочкой не обязательно пить сырую воду. Достаточно просто помыть ею овощи, которые не подвергаются дальнейшей термической обработке, и бактерии попадут в организм.
Как очистить воду от кишечной палочки?
Учитывая возможные негативные последствия от контакта с этой бактерией, закономерным становится вопрос, как убить кишечную палочку в воде. Самыми распространёнными являются:
- химический метод (например, хлорирование воды или добавление других реагентов)
- физический метод (например, кипячение)
Все эти способы призваны подавить жизнедеятельность и размножение бактерий.
Учитывая, что перед подачей в систему водоснабжения вода подвергается обеззараживанию, то риск обнаружить кишечную палочку в питьевой воде из-под крана ниже, чем в воде из колодца. Специалисты отмечают, что значительный процент колодезной воды не соответствует нормам именно по микробиологическим показателям.
Как определить загрязнение воды?
Единственным максимально надёжным способом выявить кишечную палочку является бактериологический анализ воды в лаборатории. Если проблема существует, то меры нужно принимать незамедлительно. В случае, если кишечная палочка выявлена в колодце или скважине на вашем участке, необходимо тут же прекратить использование этой воды. Затем провести полную дезинфекцию и установить мощную систему обеззараживания. Если есть возможность, лучше пробурить скважину в другом месте. Когда кишечная палочка обнаружилась в водопроводной воде, нужно проинформировать городской Водоканал и прекратить использование воды, до полного решения ситуации. (Возможно, имеет место неисправность или нарушений технологий обеззараживания воды перед подачей в систему).
Кипячение способно убить кишечную палочку и другие бактерии, но кипятить воду для всех бытовых нужд и для купания очень проблематично. Поэтому более надёжным способом является установка фильтров, в частности, системы обратного осмоса. Это поможет обезопасить себя и свою семью.
У Вас есть вопросы или Вам нужна консультация?
Заполните форму и получите бесплатную консультацию!
Escherichia coli, обычно называемая E. coli, представляет собой форму бактерий
группы кишечной палочки, которая в целом безвредна; однако некоторые
штаммы могут вызывать серьезные заболевания. Кишечная палочка — это
обычная бактерия, обнаруживаемая в пищеварительной системе людей и
животных, которая может попадать в водную систему через фекальные отходы.
Отходы могут попадать в воду разными путями, включая перетоки сточных вод,
неработающие канализационные системы, загрязненные сточные воды и
внешние стоки. Колодцы, водоемы, родники, скважины, минеральные источники
могут быть более восприимчивы к такому загрязнению, особенно если они
мелкие, были выкопаны или пробурены, или если эта вода использовалась в
качестве источника питьевой воды и не подвергалась обработке или не
обрабатывалась надлежащим образом, это может привести к заболеванию.
Заболевания, приобретенные в результате контакта с загрязненной водой, могут
вызывать заболевания желудочно-кишечного тракта, кожи, ушей, дыхательных
путей, глаз, неврологические и инфекции ран. Наиболее частыми симптомами
являются спазмы желудка, диарея, тошнота, рвота и субфебрильная
температура.
Спецификация (состав)
Одна тест-полоска в пакетике из фольги, реакционная пробирка с реагентом
лизатом, пипеткой и осушителем.
Сбор образца и подготовка
Используйте только чистый, сухой, стерилизованный контейнер для сбора пробы
воды перед исследованием. В качестве образца для анализа возьмите 1 чайную
ложку (4-5 мл) воды. Оставьте пробу воды в покое на 2 минуты.
Условия испытаний
Температура окружающей среды: 20°C — 30°C
Оптимальная температура: 25°C
Относительная влажность: ≤80%
Хранение
Тестовый набор хранить от 2°C до 30°C в сухих условиях (предпочтительно от
2°C до 8°C). Не помещайте и не храните тест в холодильнике или под прямыми
солнечными лучами. Не касайтесь тестовой (реагентной) области тест-полосок.
Держите тест подальше от влаги, прямых солнечных лучей или высоких
температур, чтобы сохранить целостность области реагента (тестовых подушек).
Кишечная палочка – 0.3-0.
Порядок проведения теста:
1) Подготовьте набор: тест-полоску, реакционную пробирку с лизатом, пипетку.
2) Реакционная пробирка уже содержит 0,5 мл лизата. Отберите 0,1 мл образца
воды в реакционную пробирку с помощью пипетки. Хорошо встряхните смесь.
3) Выньте тест-полоску с реагентом из фольги (не касаясь тестовой зоны).
Погрузите область реагента (тестовую подушку) в образец воды на 10 минут.
Качественные результаты теста — 10-минутный тест (положительный или
отрицательный)
Положительные или отрицательные результаты можно увидеть через 10 минут.
Положительный (присутствует кишечная палочка) = если тест-полоска
приобретает синий оттенок, это указывает на наличие кишечной палочки.
Продолжайте полуколичественный тест.
Отрицательный (отсутствует кишечная палочка) = если тест-полоска остается
белой, это указывает на отсутствие кишечной палочки. Тест завершен.
Порядок проведения теста:
1) Подготовьте набор: тест-полоску, реакционную пробирку с лизатом, пипетку.
2) Реакционная пробирка уже содержит 0,5 мл лизата. Отберите 0,1 мл образца
воды в реакционную пробирку с помощью пипетки. Хорошо встряхните смесь.
3) Выньте тест-полоску с реагентом из фольги (не касаясь тестовой зоны).
Погрузите область реагента (тестовую подушку) в образец воды на 10 минут.
Качественные результаты теста — 10-минутный тест (положительный или
отрицательный)
Положительные или отрицательные результаты можно увидеть через 10 минут.
Положительный (присутствует кишечная палочка) = если тест-полоска
приобретает синий оттенок, это указывает на наличие кишечной палочки.
Продолжайте полуколичественный тест.
Отрицательный (отсутствует кишечная палочка) = если тест-полоска остается
белой, это указывает на отсутствие кишечной палочки. Тест завершен.
Полуколичественные результаты теста — 60-минутный тест (уровень
присутствия кишечной палочки)
4) Погрузите полоску с реагентом в тот же тестовый раствор еще на 60 минут.
5) Через 60 минут удалите тест-полоску. Стряхните лишнюю воду.
6) Внимательно сверьте результаты теста в хорошо освещенном месте,
сравнивая тестовую подушку с цветовой диаграммой.
7) Сравните цвета тест-полосок с соответствующими цветами на таблице и
запишите свои результаты.
Предупреждение:
1. Если лизат попал в глаза или коснулся кожи, промойте большим количеством
воды.
2. Не прикасайтесь к реакционной подушке тест-полоски, чтобы избежать
неточных результатов теста.
3. Избегайте высоких температур, прямых солнечных лучей и храните тестполоску сухой.Полуколичественные результаты теста — 60-минутный тест (уровень
присутствия кишечной палочки)
Большинство бактерий представляют угрозу для организма человека, а в отдельных случаях провоцируют развитие серьёзных болезней. Кишечная палочка расположилась на одном из первых мест в группе опасных микроорганизмов.
Чаще всего она проникает в организм через воду, поэтому так важно обеспечить её качественную очистку.
Можно ли предвидеть загрязнение воды кишечной палочкой и как уберечь себя от заболевания? Ответы — в нашей статье.
Причины возникновения кишечной палочки
Причины, из-за которых водоём может быть заражён этими бактериями, связаны с жизнедеятельностью человека и животных. Основными являются:
- Выброс фекалий из старых канализаций.
- Выброс переработанных пищевых остатков.
- Использование водоёма в качестве водопоя для животных.
При увеличении температуры воды микроорганизмы начинают вести себя более активно, тем самым провоцируя интенсивное размножение. Именно поэтому особое внимание очистке воды нужно уделять летом. Настоятельно не рекомендуется пить воду из непроверенных источников или купаться в водоёмах, которые вызывают опасения.
Как определять загрязнение воды
Видимых признаков загрязнения воды кишечной палочкой практически не существует. Исключения составляют эпизоды особенно явных загрязнений, тогда будут видны очевидные показатели заражения. Например, ни в коем случае не стоит пить воду, у которой есть, пусть и слегка уловимый, неприятный запах, напоминающий об экскрементах, а также мутную воду. Однако настолько явные признаки загрязнения воды кишечной палочкой встречаются редко. Чаще всего без дополнительных проверок СЭС установить наличие бактерий в воде невозможно.
Какова угроза заражения
Различные виды кишечной палочки, попав в организм человека, способны провоцировать патологии. Чаще всего они вызывают кишечную инфекцию, сопровождающуюся сильной диареей. При несвоевременном лечении такой патологии человек может получить гемолитико-уремический синдром, который ведёт к заболеванию почек. Помимо этого палочка может проникнуть в мочеполовую систему, вызвав развитие острого цистита, вульвовагинита или уретрита. Все вышеперечисленные заболевания требуют особого внимания и верного лечения.
Способов для защиты воды от кишечной палочки существует несколько. Самым распространенным из них является кипячение. Но существует и более передовое решение — ультрафиолетовые системы обеззараживания.
9 Методы определения колиформных бактерий, общих колиформных бактерий, бактерий группы кишечной палочки, обобщенных колиформных бактерий, термотолерантных колиформных бактерий и E. coli
Колиформные, общие и обобщенные колиформные бактерии, БГКП, относятся к индикаторной группе бактерий, которая указывает на фекальное загрязнение воды и возможность присутствия возбудителей водоассоциированных бактериальных кишечных инфекций. В очищенной и дезинфицированной воде их обнаружение означает, что обработка была проведена некачественно или произошло вторичное микробное загрязнение.
9.1 Метод определения колиформных бактерий, общих и обобщенных колиформных бактерий, бактерий группы кишечной палочки и E. coli с использованием мембранных фильтров
9.1.1 При анализе питьевой воды системы централизованного водоснабжения высевают 300 см3 воды (три объема по 100 см3), пропуская этот объем не менее чем через два мембранных фильтра. При получении стабильных отрицательных результатов фильтрация 300 см3 воды допустима через один фильтр. При исследовании воды неизвестной степени бактериального загрязнения следует засевать несколько объемов, например, 10, 40, 100, 150 см3 воды.
При исследовании питьевой воды нецентрализованного водоснабжения анализируют объем пробы воды не менее 100 см3, пропуская через мембранные фильтры объемы 10 и 100 см3, размещая от двух до четырех фильтров (в зависимости от диаметра фильтров и чашки Петри) на одной чашке Петри с дифференциальной средой с условием, чтобы фильтры не соприкасались.
При исследовании упакованной питьевой воды, включая природную минеральную, а также воду для использования в алкогольной продукции, анализируют объем пробы воды 250 см3, пропуская через мембранные фильтры объемы 50, 100 и 100 или 50 и 200 см3, размещая от двух до четырех фильтров на одной чашке Петри с дифференциальной средой с условием, чтобы фильтры не соприкасались.
При фильтровании воды неизвестного качества увеличивают количество фильтруемых объемов для получения изолированных колоний (например, выполняя посев по 1 см3 из 1-го и 2-го десятикратных разведений). Фильтрующее устройство и мембранные фильтры стерилизуют по 5.8 и 5.9.
Следует начинать с фильтрования проб обеззараженной воды или тех проб, которые предположительно не загрязнены, а затем фильтровать загрязненные пробы.
При фильтровании объема исследуемой воды 1 см3 необходимо в воронку предварительно налить не менее 10 см3 стерильной водопроводной воды, а затем внести анализируемую воду с последующим созданием вакуума.
Если вода для исследования с повышенной мутностью, фильтрация больших объемов затруднена, то засевают объемы воды 0,1 см3 и 0,1 см3 из разведений засевают прямым посевом на чашки с дифференциально-диагностической средой с последующим растиранием посевов шпателем до полного впитывания влаги в среду.
9.1.2 После фильтрования анализируемой воды мембранные фильтры размещают посевом вверх на одну из селективных дифференциальных сред, например на среду Эндо, среду с тергитолом 7 или другие альтернативные селективные дифференциальные среды, разлитые в чашки Петри, добиваясь полного прилегания фильтров к толще среды, исключая образование пузырьков воздуха.
Примечание — Перед посевом чашки с селективными дифференциальными средами рекомендуется помещать на 10 — 15 мин в термостат при (44 +/- 0,5) °C для прогревания и удаления с поверхности среды влаги.
Лактозный агар с тергитолом 7 используют вместо среды Эндо при исследовании воды с небольшим числом бактерий, при условии, что взвешенные вещества и фоновая микрофлора не оказывают отрицательного влияния на фильтрацию, культивирование и учет бактерий. Среда обладает низкой селективностью, поэтому она пригодна для обнаружения поврежденных и стрессированных клеток бактерий, в том числе с замедленной ферментацией лактозы.
На одну чашку с дифференциальной средой допускается помещать от двух до четырех фильтров (в зависимости от диаметра фильтров и чашки Петри) с условием, чтобы фильтры не соприкасались. Под каждым фильтром на дне чашки делают надпись с указанием объема профильтрованной воды, номера пробы и даты посева. Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение (24 +/- 3) ч.
9.1.3 При отсутствии роста каких-либо колоний на фильтрах или при наличии только пленчатых, губчатых, с неровной поверхностью и краями, плесневых и других нехарактерных для колиформных бактерий колоний выдают отрицательный результат.
При обнаружении колоний, характерных для бактерий семейства Enterobacteriaceae (БГКП), колиформных, общих или обобщенных колиформных бактерий выполняют оксидазный тест путем наложения фильтра колониями вверх на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный оксидазным реактивом, в соответствии с А.1 и А.2 (приложение А). При прямом посеве оксидазный тест выполняют в соответствии с А.3 (приложение А).
Колонии, изменившие цвет на синий или сине-фиолетовый, из учета исключают.
Если все колонии изменили цвет, выдают отрицательный ответ.
Среди колоний, не изменивших цвет, подсчитывают отдельно колонии каждого типа.
На среде Эндо подсчитывают типичные колонии: красные, темно-красные с металлическим блеском и без него, с отпечатком на обратной стороне фильтра (лактозоположительные), розовые разных оттенков (лактозоотрицательные).
По три-четыре колонии каждого типа пересевают в пробирки с полужидкой средой Гисса с глюкозой для подтверждения их принадлежности к колиформным, обобщенным или общим колиформным бактериям, бактериям семейства Enterobacteriaceae. Посевы инкубируют при температуре (36 +/- 2) °C в течение (24 +/- 3) ч. Первичный учет на подтверждающих полужидких средах возможен через 4 — 6 ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ. При отсутствии кислоты и газа или при наличии только кислоты для окончательного учета пробирки с посевами оставляют в термостате до 48 ч.
На среде с тергитолом 7 подсчитывают типичные колонии с желто-оранжевой, кирпично-красной окраской, иногда с ржаво-окрашенным центром, образующим желтую окраску в среде под мембраной.
9.1.4 Если на фильтрах на дифференциально-диагностических средах выросли типичные лактозоположительные грамотрицательные, в соответствии с А.4 (приложение А) (допускается использовать тест Грегерсена) колонии с отрицательным оксидазным тестом, проведенным в соответствии с А.1 и А.2 (приложение А), их число суммируют, умножают на 100 и делят на профильтрованный объем. В протоколе анализа указывают количество колиформных и общих колиформных бактерий, выросших в 100 см3 воды.
Для определения бактерий E. coli типичные колонии на среде Эндо (темно-красные с металлическим блеском и отпечатком) или желтые на среде с тергитолом 7 пересевают на среды с лактозой (в лактозный бульон с борной кислотой с ватой или поплавком для улавливания газа, лактозо-пептонную среду с поплавком) и немедленно помещают в термостат при (44 +/- 0,5) °C. Среды перед посевом должны быть прогреты до температуры 44 °C — 45 °C. В качестве E. coli учитывают колонии, дающие помутнение и газообразование через (24 +/- 2) ч инкубации посевов.
Примечание — Для приготовления лактозного бульона с борной кислотой в 1 л дистиллированной воды растворяют: 10 г пептона, 12,2 г калия фосфорнокислого двузамещенного (безводного), 4,1 г калия фосфорно-кислого однозамещенного (безводного), 3,2 г борной кислоты, 5 г лактозы. После растворения всех ингредиентов при нагревании среду остужают до комнатной температуры и разливают по 5 мл в пробирки с поплавками или комочками ваты, стерилизуют при (112 +/- 2) °C 12 мин. Срок хранения — не более двух недель. Каждую новую партию борной кислоты следует испытывать. При выращивании E. coli при температуре (44 +/- 0,5) °C среда дает положительную реакцию — помутнение и газ.
Если на фильтрах выросли лактозоотрицательные колонии с отрицательным оксидазным тестом, то такие колонии пересевают в полужидкую среду с глюкозой и инкубируют посевы при (36 +/- 2) °C. Учет образования кислоты и газа проводят через 4 — 6 ч, при отсутствии газа пробирки оставляют в термостате до 24 ч для окончательного учета. Число бактерий, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа, суммируют с числом лактозоположительных колоний, сумму делят на профильтрованный объем. В протоколе анализа указывают число обобщенных колиформных бактерий, БГКП, выросших в исследуемом объеме воды.
Если при выборочной проверке колоний одного типа получены неодинаковые результаты, то вычисляют число подтвержденных бактерий одного типа X по формуле
X = (a·c)/b, (2)
где a — общее число колоний этого типа;
b — число проверенных из них;
c — число колоний с положительным результатом.
Подсчитывают число подтвержденных колоний каждой группы отдельно. Подсчет ведут только на тех фильтрах, где обнаружены изолированные колонии. Результат подсчета на каждом фильтре суммируют и определяют число КОЕ в исследуемом объеме воды Y по формуле
Y = (a·M)/V, (3)
где Y — сумма подтвержденных колоний в исследованном объеме;
M — нормируемый объем воды;
V — объем воды, профильтрованный через фильтры, на которых проводили учет.
При получении дробного ответа в протоколе исследования рекомендуется результат округлять в большую сторону.
Анализ воды заканчивают через 18 — 24 ч.
Окончательный результат указывают в протоколе анализа: «Число КОЕ колиформных бактерий в исследуемом объеме» или «Число КОЕ наименование бактерий, определяемых в соответствии с 3.7 — 3.8 в исследуемом объеме» или «Число КОЕ БГКП в исследуемом объеме» или «Колиформные бактерии в исследуемом объеме не обнаружены» или «Наименование бактерий, определяемых в соответствии с 3.7 — 3.8, в исследуемом объеме не обнаружены», или «БГКП в исследуемом объеме не обнаружены» и регистрируют в журнале испытаний.
В случаях сплошного роста на всех фильтрах и невозможности учета результатов анализа в протоколе записывают: «Сплошной рост» и анализ повторяют.
Примечание — При обнаружении оксидазоположительных колоний рекомендуется провести отсев подозрительных колоний для проведения дальнейшей идентификации и их принадлежности к P. aeruginosa.
Примеры
1 При посеве трех фильтров, через которые было профильтровано по 100 см3 образца воды, при учете результатов обнаружено, что на одном фильтре выросло две колонии в 100 см3, на остальных фильтрах рост не отмечен (отсутствует). Число бактерий рассчитывают следующим образом:
(2·100) : 300 = 0,7 КОЕ колиформных бактерий в 100 см3.
При этом в протоколе исследования результат записывают, проводя округление до целых чисел в сторону увеличения: «1 КОЕ колиформных бактерий в 100 см3» либо «0,7 КОЕ колиформных бактерий в 100 см3«.
2 При посеве 10, 40, 100, 150 см3 на фильтрах с профильтрованным объемом 40 см3 выросло четыре изолированных колонии, с профильтрованным объемом 100 см3 — три колиформные бактерии. Фильтры с объемом 10 и 150 см3 заросли и учету не подлежат. Суммируют общее число колоний на тех фильтрах, где получены изолированные колонии, и пересчитывают на объем 100 см3:
(4 + 3)·100 : (40 + 100) = 5 КОЕ в 100 см3.
При этом в протоколе исследования результат записывают «5 КОЕ колиформных бактерий в 100 см3«.
9.2 Метод определения E. coli с использованием мембранных фильтров
Для обнаружения E. coli допускается проведение дополнительного посева исследуемой воды на фильтре объемом 100 см3 на дифференциальные лактозные среды с дальнейшей инкубацией посева микроорганизмов при температуре (44 +/- 0,5) °C.
Если на мембранном фильтре в течение 18 — 24 ч не обнаружен рост колоний или выросли нетипичные колонии, то в журнале испытаний регистрируют сведения об отсутствии E. coli в пробе воды.
При наличии выросших на мембранных фильтрах характерных темно-красных колоний с металлическим блеском и отпечатком проводят их дальнейшее подтверждение на принадлежность к бактериям E. coli в соответствии с 9.1.4.
Подтверждением наличия E. coli является помутнение и газообразование в среде лактоза с борной кислотой. Подтвержденные колонии подсчитывают.
Результат испытаний выражают числом КОЕ E. coli в 100 см3 воды.
При фильтрации пробы объемом более 100 см3 или нескольких объемов пробы воды на разных мембранных фильтрах результат испытаний вычисляют по 9.1.4.
При отсутствии на фильтрах роста характерных для E. coli колоний и отрицательной реакции на подтверждающих средах в протоколе испытаний записывают: «КОЕ в 100 см3 воды не обнаружены».
При необходимости получения количественной оценки результата определения E. coli в анализируемой пробе воды подсчитывают сумму всех подтвержденных колоний в соответствии с 9.1.4.
Примечание — Допускается проведение анализа в соответствии с ГОСТ 31955.1.
9.3 Определение термотолерантных колиформных бактерий
Для определения термотолерантных колиформных бактерий работают с секторами среды Эндо, где выросли типичные лактозоположительные колонии. Делают посев двух-трех изолированных колоний каждого типа с каждого сектора в пробирки с любой из лактозных сред.
Среду перед посевом нагревают на водяной бане или в термостате до (44 +/- 0,5) °C. Немедленно после посева пробирки помещают в термостат и инкубируют при температуре (44 +/- 0,5) °C в течение 18 — 24 ч. Допускается просмотр посевов через 4 — 6 ч.
При росте на среде Эндо лактозоположительных бактерий и выявлении способности этих бактерий ферментировать лактозу до кислоты и газа в течение 18 — 24 ч при температуре (44 +/- 0,5) °C дают положительный ответ на наличие в этом объеме пробы воды ТКБ.
Результат испытаний выражают числом КОЕ ТКБ в исследуемом объеме воды по 9.2.
При отсутствии на фильтрах роста ТКБ в протоколе испытаний записывают: «КОЕ ТКБ в исследуемом объеме воды не обнаружены».
9.4 Определение колиформных бактерий, общих колиформных бактерий, бактерий группы кишечной палочки и E. coli методом мембранной фильтрации с использованием хромогенных питательных сред
Определение колиформных бактерий и E. coli в пробе анализируемой воды проводят с использованием мембранной фильтрации, применяя в качестве питательной среды одну из хромогенных сред (например, Chromocult Coliform Agar или аналога).
После фильтрации пробы воды фильтр помещают на поверхность хромогенной среды.
Инкубацию посевов проводят при температуре (36 +/- 2) °C в течение 21 — 24 ч.
По истечении времени инкубации посевов, с учетом результата оксидазного теста, подсчитывают количество окрашенных колоний, выросших на фильтре, характерных для колиформных бактерий: колонии от красного цвета до оранжевого, бесцветные, розовые (реакция с Salmon-GAL), включая E. coli: от темно-синего до фиолетового цвета (реакция с Salmon-GAL и X-глюкуронидом). Мелкие колонии не учитывают.
Обработку и оформление результатов проводят по формуле (3) в соответствии с 9.1.4.
9.5 Определение E. coli методом мембранной фильтрации с использованием среды с желчью.
Для определения E. coli используют две среды: триптон-желчный агар (ТЖА) и триптон-соевый агар (ТСА).
Фильтрование отмеренных объемов воды проводят по 5.9.
После фильтрования отмеренных объемов воды мембранные фильтры с посевами помещают на ТСА и инкубируют в термостате при температуре (36 +/- 2) °C в течение 4 — 5 ч.
Затем фильтры переносят на ТЖА и продолжают инкубацию посевов при температуре (44 +/- 0,5) °C в течение 19 — 20 ч.
После инкубации посевов учитывают наличие или отсутствие на фильтрах роста колоний.
При росте на фильтрах изолированных колоний белого, палевого, кремового цвета мембранный фильтр помещают на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом для индольного теста (реактив Ковача) и облучают ультрафиолетовой лампой в течение 10 — 30 мин в зависимости от скорости окрашивания.
Все колонии микроорганизмов красного цвета на мембранном фильтре учитывают как колонии E. coli и подсчитывают их число.
Использование реактива Ковача на водной основе (для ускоренного индольного теста) дает более четкие и быстрые результаты без применения ультрафиолетового облучения.
Неравномерное распределение колоний микроорганизмов на фильтре или обильный рост сопутствующих микроорганизмов могут мешать идентификации колоний микроорганизмов с положительной реакцией на образование индола из-за диффузии окраски в прилегающие колонии микроорганизмов.
Обработку результатов проводят по 9.1.1 аналогично обработке результатов по определению колиформных бактерий.
Результат испытаний выражают числом КОЕ бактерий E. coli в 100 см3 анализируемой пробы воды.
При отсутствии роста колоний E. coli на фильтрах или наличии отрицательной реакции на образование индола (отсутствие изменения цвета колоний) в протоколе испытаний записывают: «E. coli КОЕ/100 см3 воды не обнаружены».
9.6 Метод определения колиформных бактерий и E. coli с использованием тест-систем с готовыми питательными средами на подложке
Петрифильм тест-системы с готовыми питательными средами на подложке или с аналогичными характеристиками (далее — тест-системы) для определения колиформных бактерий и E. coli готовят к анализу в соответствии с инструкцией производителя с соблюдением правил стерильности.
Сначала проводят фильтрацию проб воды с помощью мембранных фильтров по 5.9.
После фильтрации фильтры стерильным пинцетом помещают на подложку. Посевы инкубируют в термостате при температуре (36 +/- 2) °C в течение 18 — 24 ч.
Колиформные бактерии в зависимости от использованной тест-системы определяют по следующим признакам: характерному цвету колоний, изменению цвета среды вокруг колоний. Наличие газообразования под пленкой тест-систем также подтверждает присутствие в пробе воды колиформных бактерий.
Для определения E. coli при использовании тест-систем одновременно с ростом бактерий учитывают газообразование и характерную окраску колоний, что исключает дополнительный этап их идентификации.
Расчет и оформление результатов проводят по формуле (2) в соответствии с 9.1.4.
9.7 Метод определения колиформных бактерий и бактерий E. coli с использованием среды Readycult Coliforms 100 или с аналогичными характеристиками (качественный метод)
9.7.1 Анализ с использованием среды Readycult Coliforms 100 или с аналогичными характеристиками (селективная питательная среда для определения наличия/отсутствия колиформных бактерий и E. coli в 100 см3 воды) проводят в соответствии с инструкцией производителя.
При хранении проб воды при температуре ниже 25 °C исследование следует начать не позднее чем через 6 ч после отбора проб. Пробы воды хранят не более 24 ч в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C, при этом посев начинают после нагревания пробы до комнатной температуры, но не позднее чем через 6 ч.
В стерильный прозрачный флакон вместимостью 250 см3 с завинчивающейся крышкой помещают 100 см3 образца воды.
Вынимают один пакет из упаковки, слегка постучав, чтобы гранулы среды оказались на дне пакета, после чего надламывают его верхнюю часть, не дотрагиваясь до открытой части пакета, чтобы избежать внешнего загрязнения питательной среды.
Содержимое пакета добавляют во флакон к образцу воды. Закрывают флакон и перемешивают до полного растворения гранулированной среды.
Посевы инкубируют в течение 18 — 24 ч при температуре (36 +/- 2) °C.
После инкубации посевов проводят учет результатов:
— колиформные бактерии и E. coli отсутствуют, если цвет среды не изменился или отмечено помутнение без изменения цвета среды;
— бактерии обнаружены, если среда приобрела зелено-голубой цвет во всем объеме или верхнем слое. При перемешивании цвет среды не должен изменяться.
Для подтверждения наличия E. coli в емкостях, в которых отмечено изменение цвета среды, вносят 2,5 см3 реактива Ковача. Красное кольцо на поверхности среды подтверждает образование индола, что свидетельствует о наличии E. coli в исследуемой пробе воды. Наличие E. coli допускается подтверждать также по свечению содержимого емкости в УФ-свете при использовании УФ-лампы (при наличии флуорогенного субстрата в составе среды).
Изменение цвета среды Readycult Coliforms 100 или с аналогичными характеристиками при определении наличия/отсутствия колиформных бактерий и E. coli в 100 см3 воды представлено на рисунке 1 и в таблице 1.
а) Контрастное изменение цвета среды — колиформы обнаружены
б) Цвет среды не изменился — отрицательный
результат — колиформы и E. coli отсутствуют
в) Наличие свечения (флюоресценция)
в УФ-свете — E. coli обнаружены
г) Вишнево-красное кольцо (положительный тест
на индол) — E. coli обнаружены
Рисунок 1 — Изменение цвета среды Readycult Coliforms 100
или с аналогичными характеристиками при определении
наличия/отсутствия колиформных бактерий и E. coli
в 100 см3 воды
Таблица 1
Признаки наличия/отсутствия колиформных бактерий и E. coli
при использовании среды Readycult Coliforms 100
или с аналогичными характеристиками
|
Наличие/отсутствие показателя |
Изменение цвета среды на сине-зеленый (наличие/отсутствие) |
Флюоресценция |
Индольный тест |
|
Наличие колиформных бактерий |
+ |
— |
— |
|
Наличие E. coli |
+ |
+ |
+ |
|
Отсутствие E. coli и колиформных бактерий |
Светло-желтый |
— |
— |
|
Примечание — «+» — положительный результат; «-» — отрицательный результат. |
9.7.2 При изменении цвета среды в протокол учета результатов записывают: «колиформные бактерии обнаружены в 100 см3 воды», при изменении цвета среды и флюоресценции: «E. coli обнаружены в 100 см3 воды», если цвет среды не изменился: «колиформные бактерии в 100 см3 в воде не обнаружены» или и «E. coli в 100 см3 воды не обнаружены».
Примечание — Применение аналогичных сред для определения колиформных бактерий и бактерий E. coli необходимо только в соответствии с инструкцией производителя к ним.
Скачать документ целиком в формате PDF